늘 invitrogen lipofectamine을 사용해오셨던 선생님들은,,최근 제품을 받고 고개를 갸우뚱하셨을 겁니다.
지금껏 알고 있던 manual 과 내용이 달라졌다고 하시면서 말이죠~
invitrogen website에 올려진 manual 역시 2012년 7월 version 으로 되어 있습니다.
어떤 점이 바뀌었는지 확인해볼게요,,
예전에는 media 에 antibiotics를 넣지 않도록 되어 있었지만,, 바뀐 protocol에는 요렇게,,serum과 antibiotics가 들어있어도 된다고 되어 있습니다.
하.지.만! antibiotics를 넣지 않으시는게 더 좋습니다. Transfection 하는 동안 항생제를 사용하는 것은 높은 cell death를 일으킬 수 있으니까요,, 비록, penicillin/streptomycin 이 eukaryotic cell에 toxic하지 않지만, transfection 동안 cell의 투과성이 증가하기 때문에 antibiotics들이 cell 에 많이 들어갈 수 있습니다.
예전에는 DNA,Lipofectamine 각각 optiMEM 이랑 섞어준 후 5분 반응-> 합쳐서 20min incubation이었는데..
바뀐 protocol에는 DNA+Lipofectamin 합쳐서 5min incubation 하는 것으로 시간이 단축되었습니다.
또,, 처음 settting 할때 lipofectamine 양을 달리하여 optimized condition을 잡도록 아예 manual 에 기재를 해뒀구요
24well 기준으로 봤을때,, 넣어주는 DNA 양은 줄고,, lipofectamine 양도 1-2.5ul.. 이런식으로 범위로 표현되어 있습니다.
최소량으로 봤을때,, 예전 2ul 보다도 적게 넣어줘도 되는 거구요,,
아래는 old protocol과 new protocol로 LTX를 사용한 결과입니다.
기존 방법대로 실험하셔도 되구요,, 좀 더 실험을 단순화해서 해보고 싶다고 하시면, NEW protocol을 시도해 보시는 것도 좋아요^^
